经典的生物化学技术主要用于分子定位和共定位检测,这非常适合使用 Amnis 量化成像流式分析系统,比如转录因子从细胞质到细胞核的转位、分子在亚细胞器间的运输、蛋白质在细胞内和细胞间的共定位。它可以获取复杂样品每个细胞中探针定位和共定位的统计学结果,这对于传统生物化学研究是极大的补充和拓展。

示例1:T 细胞 - 抗原递呈细胞中 NF-κB 的转运:

NF-κB在与抗原递呈细胞(APC)和特异性多肽连接的转基因T细胞中从细胞质转位到细胞核的转位。在此使用 Similarity 参数是指两幅图像间像素信号的相似性,即Similarity值越高代表NF-κB(绿色)和7-AAD染核(红色)信号相似度越高。

NF-kB translocation in T:APC conjugates detail

示例2:抗体 - 药物耦联复合物与内涵体和溶酶体的共定位:

荧光特异性标记的抗体-药物耦联复合物(ADC)通过细胞内吞作用进入细胞后与内涵体和溶酶体的共定位。此处 endosome/lysosome colocalization 的衡量是通 Bright Detail Similarity 参数实现的,它代表的是两幅图像中荧光亮点的位置。

Colocalization of an antibody-drug conjugate to endosomes or lysosomes detail

示例 3 : ImageStream 系统中利用 FRET (荧光能量共振转移)检测蛋白质间的相互作用:

FRET(荧光能量共振转移):在荧光显微镜下可以看到,荧光团可以在吸收一个波长的光之后发射出波长较长的光;当第二个荧光团离第一个荧光团足够近的时候,它就可以从第一荧光团获取能量,发射出波长更长的光。FRET对于荧光团之间的距离很敏感,如果发生了FRET,说明荧光团之间的距离大约是在10 nm。当用两个荧光团分别标记蛋白时,可以通过供体和受体荧光团间的FRET来推断蛋白质间的距离。 ImageStream 可以定量分析稀有细胞亚群中的FRET ,来衡量细胞内蛋白相互作用和细胞间连接。区别胞内发生和未发生 FRET 蛋白的位置 可以改进我们对于信号转导通路的理解。

下图所示,受体1和受体2分别用PE(供体)和AF647(受体)标记。收集细胞图片用488 nm激光激发。受刺激的样品中可以检测到AF647荧光团,说明发生了FRET现象。

FRET on the ImageStream for detection of protein-protein interactions detail